Upplösning av polypeptider
Varje aminosyra har inneboende kemiska egenskaper och en peptids löslighet beror på dess sekvens och modifieringar. Vi rekommenderar att du tar en liten mängd av peptiden för löslighetstestning innan du löser upp alla peptider.
Att lösa upp peptider är ett mycket viktigt steg. Felaktig solubilisering kan resultera i peptidförlust eller experimentellt misslyckande. Peptiders löslighet beror huvudsakligen på peptidens sekvens, så var uppmärksam när du designar peptiden. Det rekommenderas att peptidsekvensen innehåller 20 % laddade rester för att öka dess löslighet.
Före användning kan kunderna följa följande tre grundläggande principer för att välja ett lämpligt lösningsmedel för att lösa upp peptiden.
För det första måste det valda lösningsmedlet kunna lösa upp peptiden fullständigt; För det andra måste det valda lösningsmedlet vara kompatibelt med de experimentella förhållandena; Slutligen får det valda lösningsmedlet inte reagera med eller bryta ned peptiden.
Så länge mängden peptid tillåter kan du först lösa upp en liten del av peptiden och sedan lösa upp hela provet. Om du behöver återvinna peptiden från ett lösningsmedel kan du välja ett initialt lösningsmedel som gör det enkelt att ta bort efter lyofilisering.
Följande förslag kan hjälpa dig att lösa upp peptider:
Peptider med mindre än 5 aminosyror är i allmänhet lösliga i vattenlösningar och starkt hydrofoba aminosyror (W, I, L, F, M, V, Y) förutom.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25% Laddade aminosyror (E, D, K, R, H) av hydrofila peptider och som innehåller<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25%Laddade aminosyror kan också vara olösliga eller delvis lösliga i vatten. Det är bäst att först lösa upp peptiden i en minimal mängd av ett starkt organiskt lösningsmedel såsom DMF, ACN, isopropylalkohol, etanol, ättiksyra, 4-8 M GdnHCl, urea eller DMSO (ej i sekvens C, W, M ), och andra liknande organiska lösningsmedel. Det är bäst att långsamt tillsätta det organiska lösningsmedlet som löser upp peptiden i vattenlösningen droppe för droppe. Om lösningen blir grumlig kan den ha nått löslighetsgränsen och det är ingen idé att fortsätta lösa upp den. Det bör noteras att det initialt valda lösningsmedlet bör vara kompatibelt med det experimentella systemet.
Hydrophobic amino acid content >75% Starkt hydrofoba peptider är i allmänhet också olösliga i vattenlösningar. Sådana peptider bör också behandlas först med starka organiska lösningsmedel (t.ex. TFA, myrsyra) löser upp och kan också fällas ut om de sätts till en vattenlösning. Den slutliga peptidlösningen kan kräva höga koncentrationer av organiska lösningsmedel för att denaturera den, och organiska lösningsmedel används i allmänhet inte för biologiska funktionsstudier i levande celler.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Polypeptidsekvenser tenderar att bilda redundanta intermolekylära vätebindningsnätverk och bildar lätt geler i koncentrerade vattenlösningar. Sådana peptider kan solubiliseras enligt beskrivningen i steg 3. För att minska eventuella problem under upplösning, rekommenderas det att kunderna ägnar mer uppmärksamhet åt designen och sekvensen för att förbättra peptidens löslighet.